PEMBUATAN LARUTAN STANDAR DAN PEREAKSI PEMISAH KIT RIA T3

Sari

PEMBUATAN LARUTAN STANDAR DAN PEREAKSI PEMISAH UNTUK KIT RIA T₃. Telah dilakukan pembuatan dan penentuan kualitas serum bebas T₃, larutan standar, dan pereaksi pemisah untuk kit RIA T₃. Serum bebas T₃ yang digunakan sebagai larutan standar 0 dibuat dengan mengadsorpsi T₃ pada "Charcoal" yang dicampurkan pada serum manusia. Serum bebas T₃ yang diperoleh ternyata memberikan nilai persen ikatan (%B) = 53,9 % yang lebih tinggi dibandingkan dengan standar 0 kit komersil %B = 40,67%. Hal ini menunjukkan bahwa serum bebas T₃ yang diperoleh cukup baik. Larutan standar T₃ yang dibuat cukup baik dilihat dari hasil kalibrasi dengan larutan standar sekunder. Dilakukan pula pembuatan 3 macam pereaksi pemisah yaitu; Antibodi kedua yang dimurnikan dengan amonium sulfat yang diimobilisasi pada partikel magnetik (Hungaria); antibodi kedua "Fitzgerald" yang diimobilisasi pada partikel magnetik (Hungaria); dan antibodi kedua "Fitzgerald" yang diimobilisasi pada partikel magnetik "Fitzgerald". Dari perbandingan parameter kontrol dua macam antibodi kedua yang diimobilisasi pada partikel magnetik (Hungaria) menunjukkan kedua antibodi mempunyai kualitas yang sama. Pada perbandingan parameter kontrol partikel magnetik Hungaria dan magnetik Fitzgerald, diperoleh nilai persen Bo (34,6 %) dan NSB (3,2 %) untuk partikel magnetik Hungary yang lebih rendah dari % Bo (52 %) dan NSB (5,5%) partikel magnetik Fitzgerald tetapi nilai Bo/NSB (II) dan slopenya (1,3) lebih tinggi dibandingkan nilai Bo/NSB (9,5) dan slope (0,9) partikel magnetik Fitzgerald. Jumlah partikel yang dibutuhkan pertabung untuk partikel magnetik Fitzgerald cukup banyak (80 µg), sedangkan untuk partikel magnetik Hungaria hanya 16 µg. Kedua partikel mempunyai kelebihan dan kekurangan, tetapi partikel magnetik Hungaria lebih baik sebagai pendukung padat untuk pereaksi pemisah. Dari hasil studi banding, diperoleh bahwa kit RIA T₃ dengan larutan pemisah Ab.kedua-Magnetik Hungaria mempunyai korelasi yang baik (99,1%) dengan kit RIA T₃ komersial DPC.

PREPARATION OF STANDARD SOLUTION AND SEPARATING REAGENT FOR T₃ RIA KIT. Preparation of T₃-free serum, standard solution and separating reagent have been carried out and tested. T₃-free serum which was used as a solvent of T₃ standards was prepared by addition of charcoal into human serum to adsorb the T₃ hormon. Comparison of the T₃-free serum with the standard 0 of a commercial RIA kit showed that the binding (%B) of the prepared T₃-free serum was (53.9 %) higher than the commercial kit (40.67 %), indicated that the prepared T₃-free serum was excellent. The T₃ standard solutions prepared with the T₃-free serum were calibrated against secondary standard solutions showed a reasonably good correlation, as there was no significant difference observed against expected value. Assay performance of three different separating reagents, i.e : (NH₄)S0₄-purified second antibodies immobilized onto Hungary magnetic particles, impurified Fitgerald second antibodies immobilized onto Hungary magnetic particles, and impurified Fitzgerald second antibodies immobilized onto fitzgerald magnetic particles, were compared. Comparison of control parameters of the purified and impurified second antibodies immobilized onto Hungary magnetic particles showed that both antibodies have similar quality. Hungary magnetic particles gave lower %B/T and %NSB (34.6%) and (3.2%) than Fitzgerald magnetic particles (52%) and (5.5%) however higher Bo/NSB and slope (9.5 and 0.9) were observed for Hungary magnetic particles as compared to Fitzgerald's (11 and I.3). For a sufficient separation, the required amount of Hungary magnetic particles per assay tube was much lower (16 µg) than of Fitzgerald magnetic particles (80 µg). Therefore, it is considered that the Hungary magnetic particles was a better solid phase separating reagent. Assay comparison between the prepared T₃ RIA reagent and a commercial (DPC) T₃ RIA kit showed a very well correlation (99.I %).